栀子豉汤镇静催眠作用机制研究

发布时间:2020-04-21 00:00:00

失眠是临床常见的睡眠障碍性疾病,调查显示,全球失眠的发病率为28%,中国成年人失眠发病率达38.2%,超过3亿中国人有睡眠障碍[1]。随着我国社会经济的高速发展,社会越来越多元化,复杂的社会生态和老龄化日益加剧都影响着人们的心身健康,失眠患病率日益增加。因此研究失眠的病因病机和治疗,具有重要意义。

栀子豉汤出自《伤寒杂病论》第76条:“发汗后,水药不得入口,为逆,若更发汗,必吐下不止。发汗吐下后,虚烦不得眠,若剧者,必反复颠倒,心中懊,栀子豉汤主之。”栀子豉汤由炒栀子、淡豆豉组成,栀子苦寒,清透郁热,解郁除烦,可导热下行;淡豆豉气味俱轻,既能透表宣郁,又可和降胃气[2];两药配伍,清中有宣,宣中有降,共奏清宣郁热之效。此方药简效宏,是治疗热郁胸膈不寐的经方。现代研究表明,栀子中的主要活性成分环烯醚萜苷类具有抗炎、抗氧化、降血脂,改善失眠、焦虑、抑郁症状等多种药理作用[3]。目前,关于栀子豉汤镇静催眠作用的研究较少,本实验拟通过研究栀子豉汤对小鼠的镇静催眠作用,初步探讨其在镇静催眠方面的作用机制。

1研究材料

1.1仪器

恒温水浴锅(金坛市精达仪器制造公司,HH-6数显恒温);电子天平[丹佛仪器(北京)有限公司,型号:MP6001];微量台式高速离心机(Cat.No:911115110000);BioTek酶标仪(美国,BioTekInstruments,Inc);Nikon80i生物显微镜摄像系统(日本,尼康公司)。

1.2试剂与药材

栀子、淡豆豉由河南中医药大学第一附属医院提供,符合《中华人民共和国药典》2015年版规定;天王补心丹(芜湖张恒春药业有限公司,生产批号:1811071,36g/瓶);氯化钠注射液(河南科伦药业有限公司,生产批号:A18013101-2);戊巴比妥钠(国药集团化学试剂有限公司,CAS:57-33-0,生产批号:TP20160910,25g/瓶);去甲肾上腺素(NE)ELISA检测试剂盒(生产批号:CK-E91494M);5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)ELISA试剂盒(生产批号:CK-E91467M)。试剂盒均为南京建成生物工程研究所有限公司提供。

1.3实验动物

CD-1(ICR)种小鼠[由北京维通利华实验动物技术有限公司提供质量检测,单位许可证号:SCXK(京)2016-0006,编号:11400700380031]50只,SPF等级,雌性,体质量为(30±2)g,室温为(25±2)℃,通风条件下适应性饲养3d,小鼠自由饮水和摄食,水源和饲料均经过合格检验。

2研究方法

2.1药物制备

栀子豉汤在《伤寒杂病论》中描述为“栀子十四枚,擘香豉四合,绵裹;上两味,以水四升,先煮栀子,得两升半,内豉,煮取一升半,去滓,分为二服,温进一服,得吐者,止后服”。根据现代临床应用剂量折算为炒栀子9g,淡豆豉4g。本实验选用炒栀子45g,淡豆豉20g,熬制时先将炒栀子放入2000mL水中,煮至1250mL后加入淡豆豉,最后浓缩至313mL(1mL药液中约含有生药0.208g)。取2份适宜剂量原液,用蒸馏水分别稀释到25%、50%,与原液分别组成栀子豉汤低、中、高剂量组,冰箱-4℃保存。将天王补心丸配制成浓度为0.1g/mL的水溶液。将戊巴比妥钠配制成浓度为0.3%的氯化钠溶液。

2.2动物分组及给药方法

选取CD-1(ICR)小鼠50只,随机分为空白对照组、天王补心丹组、栀子豉汤高剂量组、栀子豉汤中剂量组、栀子豉汤低剂量组,每组10只。每日8∶00—9∶00按照下列剂量给小鼠灌胃给药1次:栀子豉汤高剂量组按日给药剂量4330mg/kg(按人/鼠体表面积等效剂量换算,相当于成人剂量的20倍)灌胃,栀子豉汤中剂量组按日给药剂量2170mg/kg(相当于成人剂量的10倍)灌胃,栀子豉汤低剂量组按日给药剂量1080mg/kg(相当于成人剂量的5倍)灌胃,天王补心丹组按日给药剂量2000mg/kg(相当于成人剂量的10倍)灌胃。空白对照组按等体积氯化钠注射灌胃。每日灌胃1次,每组连续给药7d。

3观察指标与结果

3.1小鼠状态观察

观察每组小鼠的饮食、排便、体质量、精神和活动情况等一般状态,统计死亡率。空白对照组和栀子豉汤低剂量组实验过程中各死亡1只。

3.2记录翻正反射消失时间及睡眠持续时间

最后1次灌胃给药1h后,进行镇静催眠实验。腹腔注射已配制的戊巴比妥钠溶液,按每只45mg/kg的剂量给药,密切观察并详细记录小鼠的翻正反射消失时间(从给小鼠注射戊巴比妥钠到小鼠无法自主翻身的时间)及其睡眠持续时间。实验在室温(25±2)℃、通风、安静条件下进行,不可对睡眠小鼠有任何人为干预帮助苏醒。

3.3小鼠脑组织NE、5-HIAA检测

第7日药物灌胃24h后断头处死小鼠,在冰上立即取出脑组织,用氯化钠注射液轻轻冲洗,去除血迹,然后放在滤纸上,快速将水吸干净。精密称重,用锡箔包裹,储存在-80℃冰箱中,待测。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠脑组织中NE、5-HIAA的含量。测定步骤如下:室温环境中把试剂盒均衡20min以后,从铝箔袋中取出实验所需的板条数目;设置好标准品孔和样本孔,其中R为空白孔;样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加;除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,装进原来的铝箔袋中,用保鲜膜缠裹,放在37℃的水浴锅中温育60min;把包裹住的板条拿出来,迅速翻转倒出孔中液体,并用吸水纸吸干,每孔用洗涤液滴满,1min后迅速翻转倒出洗涤液,用吸水纸吸干,重复此过程5次;把底物A、B分别滴至每个孔里,均滴加50μL,用封板膜封住板条,装入铝箔袋中,用保鲜膜包裹,在37℃的环境下避开光照,孵育15min;然后取出板条,在每个孔中滴加50μL终止液,15min内在450nm波长的酶标仪里测定各孔的OD值,并将数据记录保存。

3.4统计学方法

采用SPSS19.0统计学软件处理数据。每组数据用单因素方差分析,以均数±标准差表示,采用t检验。P<0.05为差异具有统计学意义。

3.5结果

(1)翻正反射消失时间、睡眠持续时间比较与空白对照组比较,栀子豉汤高、中剂量组和天王补心丹组小鼠的翻正反射消失时间显著缩短,栀子豉汤高、中剂量组、天王补心丹组小鼠睡眠持续时间延长,差异具有统计学意义(P<0.05);天王补心丹组与栀子豉汤高剂量组翻正反射消失时间、睡眠持续时间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

(2)NE、5-HIAA含量比较与空白对照组比较,天王补心丹组、栀子豉汤中、高剂量组小鼠脑组织中的5-HIAA含量水平显著升高(P<0.05),NE含量水平显著降低(P<0.05);天王补心丹组与栀子豉汤高剂量组小鼠脑组织中的NE、5-HIAA含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

4讨论

不寐是以经常不能获得正常睡眠为特征的一类病证,主要表现为睡眠时间及深度不足,轻者入睡困难,或寐而不酣,时寐时醒,或醒后不能再寐,重则彻夜不寐[4]。失眠在女性和老年人群中发病率较高,老年人失眠发病率为12%~25%,伴有生理、心理性疾病的老年人群发病率更高[2]。随着社会经济的发展,生活节奏的加快,年轻人也开始出现各种各样的失眠问题,失眠患者普遍存在高发病率和高共患病性的特点[5]。长期失眠会导致记忆力减退、认知能力下降,甚至诱发心脑血管及神经性疾病[6]。西医治疗失眠主要以药物和心理治疗为主,镇静催眠药物不良反应明显,心理疗法也有一定局限性。中医药治疗失眠,具有疗效好、安全性高、不良反应少等优势。

栀子豉汤用于治疗热郁胸膈、虚烦不得眠之证,由栀子和淡豆豉两味药物组成。栀子始载于《神农本草经》,味苦性寒,归心、肺、三焦经,具有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒之功,善清三焦火邪,泻心火而除烦,为治热病心烦、燥扰不宁之要药。《名医别录》谓其可疗“胸心、大小肠大热,心中烦闷”。《本草衍义》云:“栀子虽寒无毒,治胃中热气,既亡血、亡津液,腑脏无润养,内生虚热,非此物不可去。”现代药理学研究表明,栀子具有镇静作用,加热炮制后镇静作用增强[7]。《本草从新》谓豆豉:“苦泻肺,寒胜热,发汗解肌,调中下气,治伤寒寒热头痛,烦躁满闷,懊不眠,发斑呕逆。”《本草易读》云豆豉:“调中下气,除烦止呕。”两药合用,清中有宣,宣中有降,互济互用,为轻宣胸中郁热,治虚烦懊不眠之良方[3]。

天王补心丹为安神剂,现代临床常用于治疗神经衰弱心脏病精神分裂等所致的失眠心悸证[8]。目前,对于天王补心丹的临床应用及药理药效研究比较成熟,其治疗失眠多虑的疗效良好,故本实验将其作为栀子豉汤的对照品。

NE是维持睡眠觉醒的重要神经递质,在脑组织中的海马体、丘脑等部位含量较高,通过促进神经元兴奋达到维持觉醒的目的。失眠与大脑中的NE含量升高密切相关,研究表明,药物可通过降低脑组织中NE水平,抑制其维持觉醒的作用[9]。5-羟色胺(5-HT)生成的无活性酸性代谢终产物可间接反映5-HT的变化,5-HT为失眠的重要参考指标。如在抑郁症失眠模型动物的脑组织中,5-HT与5-HIAA均有所下降[10],动物被剥夺睡眠后,其脑组织内海马、下丘脑的5-HIAA与5-HT的比值上升,提示失眠能使脑中5-HT的代谢率升高。

本研究结果显示,与空白对照组比较,栀子豉汤高、中剂量组和天王补心丹组小鼠的翻正反射消失时间显著缩短(P<0.05),栀子豉汤高、中剂量组、天王补心丹组小鼠睡眠持续时间延长(P<0.05),且小鼠脑组织中的5-HIAA含量水平显著升高(P<0.05),NE含量水平显著降低(P<0.05);天王补心丹组与栀子豉汤高剂量组翻正反射消失时间、睡眠持续时间及小鼠脑组织中的NE、5-HIAA含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。表明栀子豉汤与天王补心丹均有镇静催眠作用,能与戊巴比妥钠产生协同作用,缩短小鼠翻正反射消失时间,延长小鼠的睡眠持续时间,且高剂量组效果更明显,这与张仲景利用其治疗“虚烦不得眠”一致;且提示栀子豉汤能在一定程度上降低小鼠脑组织海马、下丘脑中NE的含量,降低脑部神经元的兴奋性,降低其维持觉醒的综合能力。5-HIAA的含量升高,可能与5-HT代谢增多有关。栀子豉汤低剂量组小鼠的睡眠持续时间略高于空白对照组小鼠,但无明显差异,且小鼠脑组织中NE、5-HIAA含量并无明显变化,可能因为栀子豉汤剂量过低,在有限的给药期间未产生相应的药理作用。

综上所述,栀子豉汤对小鼠有镇静催眠作用。栀子豉汤高剂量组作用效果最佳,其机制可能与神经递质5-HT、5-HIAA有关,符合镇静催眠小鼠脑组织中神经递质的变化情况[11]。本研究为栀子豉汤抗焦虑、抑郁和治疗失眠的临床药理学研究做了一定补充,但栀子豉汤的镇静催眠作用对小鼠脑组织中神经递质的具体影响,需要进一步探讨及研究。

来源:中国民间疗法作者:康璐刘倩刘玉晔崔书克

河南中医药大学第三临床医学院

精彩图片

热门精选

大家正在看